Inżynieria genetyczna

Ktore z podanych niżej związków mogą być wykorzystane do znakowania fragmentu DNA przy wykorzystaniu kinazy polinukleotydowej:

Które z podanych wektorów jest najmniej przydatny do sekwencjonowania genomu ssaczego ?

Rysunek wektora pGEM3Z i wskazać cechy prawdziwe:

Pytanie na temat pożywki M9 :(jej charakterystyka

W celu otrzymania preparatu DNA plazmidowego z kom. bakteryjnej dodano NaOH w takiej ilosci iz wartosc pH wynosila 12.5 Ktory z opisow / charakterystyk jest prawdziwe

Mamy opisany eksperyment restrykcji jakiegoś faga. Najpierw 16 µl DNA w probówce. Do tego dodajemy kolejno: 1. 2µl buforu 2. 2 µl roztworu z enzymem Pytanie: Skoro optymalne stężenie NaCl dla enzymu to 50mM to jakie było wyjściowe stężenie tej soli w dodawanym buforze

W trakcie elektroforezy w żelu agarozowym, w nieobecności bromku etydyny:

Dwie próbki kompetentnych komórek E.coli poddano transformacji wektorem zawierającym gen AmpR (opornosc na ampicyline). I potem mamy dwie różne sytuacje: 1. dodano do nich niewielka ilosc pozywki plynnej i po ok. 2 min umieszczono na pożywce zawierająca ampicylinę. 2. dodano ta sama ilosci pozywki plynnej i po 30 min inkubacji umieszczono na pożywce z ampicylina. Jakie zanotowano obserwacje:

Fragmenty (ramiona - w sumie 30kb) WEKTORA ZASTĘPCZEGO poddawano ligacji z fragmentami DNA majacymi prawidlowe konce lepkie odpowiednie do ramion wektora. Jaki maksymalny rozmiar mogl mieć wsczepiany w ten wektor odcinek:

Doświadczenie ktorego celem jest nokaut genu mysiego XYZ. Komórki macierzyste, do których wprowadzany jest gen rekombinowany:

W pewnym laboratorium prowadzono badania, których celem było scharakteryzowanie aktywatora transkrypcji genu glukokinazy wątrobowej. W tym celu korzystając z odpowiedniej biblioteki sklonowano gen, z wysokim prawdopodobienstwem kodujący ten aktywator. W celu eksperymentalnego potwierdzenia, że otrzymany DNA rzeczywiście koduje aktywator posłużono się testem zilustrowanym na przedstawionym poniżej schemacie. W teście tym wykorzystano dwa plazmidy - jeden z nich zawierał gen kodujący aktywator, drugi gen reporterowy. Plazmidami tymi transfekowano odpowiednie komórki. Które z poniższych twierdzeń są prawdziwe w odniesieniu do testu zilustrowanego na schemacie

Spośród podanych poniżej zestawów proszę wybrać zawierający najwłaściwsze uzupełnienia dla następującego twierdzenia: “ddNTP, używany do sekwencjonowania DNA metodą Sangera charakteryzuje się tym, że nie posiada on …....... przy węglach …..... i ”

Jednym z etapów eksperymentu zmierzającego do izolacji nieznanego czynnika transkrypcji (represora XYZ) była chromatografia jonowymienna. W celu identyfikacji frakcji zwierających ten czynnik posłużono się techniką odcisku stopy z wykorzystaniem DNazy I (ang. Dnase I footprinting). Jako sondę użyto znakowany radioizotopowo fragment DNA zawierający sekwencje elementu regulatorowego specyficznie oddziałującego z represorem XYZ. Na rysunku poniżej przedstawiono wyniki analizy autoradiograficznej żelu poliakrylamidowego otrzymanego po wykonaniu DNase I footprinting dla 22 frakcji (od 1 do 22) jakie otrzymano po chromatografii. Na autoradiogramie widoczne są też inne kontrolne/ pomocnicze ślady. Na podstawie analizy autoradiogramu można przypuszczać, że:

W celu wyznaczenia sekwencji 5’ końca transkryptu można posłużyć się metodą RACE. Kluczowym etapem RACE jest synteza polinukleotydu komplementarnego do transkryptu. Spośród enzymów/ odczynników podanych poniżej proszę wybrać te, które mogą być w tym celu użyteczne:

Indukowane przez wirusa wyciszanie genów (virus induced gene silencing VIGS) to technika:

Które z podanych poniżej informacji są prawdziwe w odniesieniu do eksperymentu pirosekwencjonowania DNA?

Które z poniższych twierdzeń jest prawdziwe w odniesieniu do real- time PCR?

Aby komórki E.Coli uległy transformacji cząsteczkami rekombinowanych plazmidów komórki te muszą być:

Które z poniższych elementów są konieczne do przeprowadzenia ekspresji sekwencji kodującej genu eukariotycznego w komórce bakteryjnej:

Jeżeli fragment sekwencji nici DNA, która podlega sekwencjonowaniu jest 5’-AAACCCGGGTTTAAACCCGGGTTT-3’, to sekwencja oligonukleotydu, który ma być użyty jako starter/primer powinna być:

Eksperyment, którego celem jest określenie profilu genetycznego w oparciu o PCR, w trakcie którego wykorzystywanych jest jednocześnie kilka różnych zestawów starterów, nazywamy:

Które z opisanych poniżej problemów/ zjawisk mogą być przyczyną nieskutecznej ekspresji cDNA genu eukariotycznego w komórce bakteryjnej, przejawiającej się brakiem rozpuszczalnego produktu białkowego:

Które poniższych enzymów nie są potrzebne przy tworzeniu cDNA na matrycy z mRNA

W celu przeprowadzenia trawienia enzymem restrykcyjnym XYZ do 14ml próbki zawierającej DNA dodano 2 ml odpowiedniego dla tego enzymu buforu, 2 ml roztworu zawierającego enzym i 2 ml wody destylowanej, tak przygotowana mieszanina reakcyjna pozwoliła na otrzymanie prawidłowych i z dobrą wydajnością produktów. Wiedząc, że optymalne dla enzymu XYZ stężenie NaCl wynosi 100mM można wywnioskować iż w buforze wyjściowym wartość stężenia tej soli wynosi:

Komórki większości szczepów bakteryjnych, używanych w laboratorium inżynierii genetycznej, mogą być hodowane w pożywce płynnej. Dostarcza ona różnych składników potrzebnych dla wzrostu kultury bakteryjnej. Jedną ze znanych pożywek jest minimalna pożywka M9. Które z podanych poniżej charakterystyk/opisów są prawdziwe w odniesieniu do pożywki M9:

Profilowane genetyczne wymaga identyfikacji wariantów sekwencji typu STR (short tandem repeats) w allelach. W tym celu wykonywany jest PCR a następnie analiza produktów amplifikacji. Typowa analiza polega na określeniu:

W celu otrzymania preparatu DNA plazmidowego z kom. Bakteryjnej dodano NaOH w takiej ilości, iż wartość pH wynosila ok. 12,35. Które z opisow sa prawdziwe :

Spośród podanych poniżej temperatur hybrydyzacji proszę wybrać tę, która pozwoli z najwyższym prawdopodobieństwem na wydajne otrzymanie specyficznego produktu w PCR przeprowadzonym przy udziale następującej pary starterów 5’GGTAATCGGTTAGGCTCC3’oraz 5’GGAGCCTAACCGATTACC3’

Anemia sierpowata jest wynikiem mutacji występującej w recesywnym allelu genu (jakimś tam). Mutacja powoduje, iż w genomie brak jest charakterystycznego dla sekwencji dzikiej miejsca restrykcyjnego Mst II. W konsekwencji analiza Southerna( Southern Blotting) identyfikuje tylko jeden fragment DNA (1.3 kb) dla allelu zmutowanego i dwa fragmenty (1,1 kb i 0,2 kb) dla allelu dzikiego gdy przed analizą DNA jest trawiony enzymem Mst II. Poniżej podano opisy różnych wyników analizy Southerna. Który z nich odpowiada parze rodziców, których dziecko z 25 % prawdopodobieństwem będzie chore na anemię sierpowatą:

Poniżej przedstawiono wynik analizy elektroforetycznej produktów PCR otrzymanych w wyniku eksperymentu, którego celem było oznaczenie płci na podstawie analizy DNA wyizolowanego z próbek archeologicznych. Ślad 1 standard wagowy (marker), ślady 2,3,4 analiza 3 produktów PCR. Podczas eksperymentu zastosowano typowe dla tego typu analizy startery, które eliminują możliwość otrzymania niejednoznacznego wyniku, gdy PCR nie będzie miało miejsca- na przykład z powodu słabej jakości matrycy. Które z poniższych stwierdzeń są prawdziwe:

Wektor plazmidowy posiada gen markerowy Amp odpowiadający za odporność transformowanych bakterii na ampicylinę. Jedno z miejsc restrykcyjnych zlokalizowanych w obrębie sekwencji wielokrotnego klonowania (MCS) tego wektora zostało strawione enzymem restrykcyjnym a powstały w ten sposób zlinearyzowany plazmid ligowano z biblioteką fragmentów DNA o komplementarnych do wektora końcach. Biblioteka zastała otrzymana z plazmidu odpowiedzialnego za oporność niektórych szczepów bakteryjnych na działanie ampicyliny, chloramfenikolu, erytromycyny i innych antybiotyków. Poniżej podano zawartość antybiotyków w kilku różnych podłożach stałych. Które z tych podłoży mogą być użyte do wyselekcjonowania klonu zawierającego gen kodujący acetylotransferazę chloramfenikolu, enzym który modyfikując chloramfenikol zmienia go w związek nietoksyczny dla komórek bakteryjnych?

Wektor plazmidowy poddany linearyzacji enzymem EcoRI został, bezpośrednio po inaktywacji enzymu, użyty do ligacji z ds. DNA powstałym w wyniku hybrydyzacji dwóch syntetycznych oligonukleotydów (insert); syntetyczny ds. DNA został tak zaprojektowany, iż posiada końce identyczne z końcami wektora (EcoRI). Mieszaniną koligacyjną poddano transformacji komórki bakteryjne i wysiano je na podłoże zawierające odpowiedni dla wektora antybiotyk. Które z podanych poniżej twierdzeń są prawdziwe ( zakładamy, że analizie poddano odpowiednio dużą ilość klonów):

Przy pomocy techniki primer extension można mapować 5’ koniec transkryptu. W tym samym celu można też posłużyć się techniką wykorzystującą nukleazę S1 (S1 mapping). Która z podanych poniżej czynności/informacji nie ma miejsca ( nie jest prawdziwa) w przypadku pierwszej z wymienionych technik?

Które z twierdzeń dotyczących reakcji łańcuchowej polimeryzacji (PCR) są prawdziwe?

Wektor kosmidowy został poddany ligacji z fragmentami DNA o przypadkowej (różnej) długości w celu przygotowania biblioteki genomowej człowieka. Maksymalna długość insertów składających się na bibliotekę będzie najprawdopodobniej wynosić:

W pewnym laboratorium postanowiono zidentyfikować w bibliotece cDNA pochodzącej z komórek człowieka klon odpowiadający genowi XYZ. W tym celu postanowiono posłużyć się techniką hybrydyzacji z użyciem sondy, będącej fragmentem cDNA genu homologicznego, zidentyfikowanego uprzednio podczas analizy klonów, pochodzących z biblioteki otrzymanej z komórek Drosophila melanogaster. Jaka, Twoim zdaniem, powinna być temperatura hybrydyzacji sondy z repliką biblioteki, zawierającej klon poszukiwanego genu, wykonaną na krążku nitrocelulozowym?

Które z podanych poniżej enzymów będą dawały produkty, które można poddać, bez dodatkowych zabiegów, radioaktywnemu znakowaniu przy pomocy [α32P]-dATP i fragmentu Klenowa? W nawiasach podano sekwencje, dla uproszczenia tylko jednej z nici, rozpoznawanej przez odpowiednie enzymy, gwiazdka oznacza położenie trawionego wiązania fosfodiestrowego.

Które z podanych poniżej informacji są prawdziwe w odniesieniu do ligacji fragmentów DNA o koncach tępych przy pomocy topoizomerazy DNA?

Wektor będący pochodną faga lambda (lambda EMBL4; replacement vector) poddano trawieniu enzymem EcoRI, a następnie powstałe produkty rozdzielono elektroforetycznie. Otrzymane w ten sposób “ramiona” wektora poddano ligacji z fragmentami DNA o końcach EcoRI i długości około 20 kb. Po ligacji upakowano fagi in vitro i infekowano nimi bakterie. Analizie poddano DNA wszystkich powstałych łysinek i zidentyfikowano takie, które zawierały:

Produkty PCR, otrzymane przy pomocy polimerazy Taq zazwyczaj zawierają na swoich 5’ koncach niesparowane reszty A. Fakt ten można wykorzystać do klonowania tych produktów przy pomocy zlinearyzowanego, tzn. występującego w formie liniowej cząsteczki ds DNA, wektora plazmidowego posiadajacego na 3’ końcach komplementarne do produktu PCR reszty. Wektor w formie bezpośrednio nadającej się do ligacji z produktami PCR można otrzymac w laboratorium. W tym celu wektor plazmidowy jest trawiony w obrębie sekwencji polilinkerowej przez enzym restrykcyjny, którego produkty mają końce tępe. Spośród podanych poniżej enzymów/ odczynników prosze wybrać te, które pozwolą otrzymać, z tak przygotowanego wektora, wektor w formie nadającej się do klonowania zdefiniowanych powyżej produktów PCR:

W analizie Southern (ang. Southern hybridization) fragment sekwencji genu aktyny z drożdży został użyty jako sonda do analizy fragmentów powstałych w wyniku trawienia EcoRI DNA genomowego z D. stramonium. Na autoradiogramie zaobserwowano jedno pasmo odpowiadające cząsteczkom DNA o długości 4 kb. Oznacza to, że:

Rysunek wektora (chyba Shuttle Vector). Co jest charakterystyczne tylko dla drożdży?

Poniżej podany jest schemat wektora. Korzystając z zawartych w schemacie informacji proszę wybrać te z cech/ charakterystyk, które są prawdziwe:

Charakterystyka wektora pBluescript II KS

Które ze zdań dotyczących Nukleazy SI są poprawne?

Który ze zwiazków może być użyty jako substrat do enzymatycznego znakowania izotopem P32 fragmentu DNA o końcach tępych?

Dla elektroforezy NIE jest prawdą

Enzym restrykcyjny ClaI rozpoznaje sekwencje ATˇCGAT i trawi wiązanie fosfodiestrowe pomiędzy resztami T i C. Enzym restrykcyjny TaqI rozpoznaje sekwencje TˇCGA

Może być użyty jako substrat do radioaktywnego znakowania fragmentu DNA przy wykorzystaniu fragmentu Klenowa polimerazy I DNA: NIE MA ECORI

Zakładajac ze polimeraza Taq nie traci aktywności, a substraty PCR nie ulegają rozkładowi, można powiedzieć, że docelowa sekwencja DNA jest powielona po n-cyklach: