1) Kompleks enzym - substrat powstaje tylko wtedy, jeżeli stężenie substratu jest znacznie większe od stężenia enzymu.
2) W kompleksie enzym z substratem może być połączony oddziaływaniami kowalencyjnymi
3) Kompleks enzym - substrat może powstać wtedy, gdy centrum aktywne enzymu i substrat są wzajemnie strukturalnie dopasowane