Pytanie 32
Mamy gen w pojedynczej kopii. Chcąc go wykryć użyto sondy o odpowiednio do niego (tego genu) komplementarnej sekwencji. Była to metoda fluorescencyjna FISH, a eksperyment przeprowadzono na chromosomach w trakcie profazy. Co zaobserwowano: wyobraź sobie, że dysponujesz klonem (tzn. sekwencją) jakiegoś genu, który możesz przypuszczać na podstawie analiz genetycznych, jest zlokalizowany w odległości nie większej niż 200kb od genu odpowiedzialnego za powstawanie jakieś choroby. Spośród podanych poniżej czynności proszę wybrać TYLKO NIEKTÓRE składające się w odpowiedniej sekwencji na eksperyment (technikę), które pozwolą na odczytanie sekwencji w tym obszarze 200kb.
Powtarzanie czynności opisanych w poprzednich dwóch etapach do momentu otrzymania odpowiedniej ilości klonów
Subklonowanie fragmentu z końca nowo izolowanego klonu w celu otrzymania nowej sondy do ponownego przeszukiwania biblioteki i identyfikacji nowego klonu hybrydyzowanego z sond
Izolacja genomowego DNA z E.coli
Częściowe trawienie DNA enzymem BamHI w celu otrzymania zachodzących na siebie (względem sekwencji) fragmentów o dl ok. 20 kb
Całkowite (wyczerpujące) trawienie DNA enzymem EcoRI
Otrzymanie biblioteki w fagu lambda
Northern-blotting sondą otrzymana przy wykorzystaniu genu A
Izolacja ludzkiego genomowego DNA
Przeszukiwanie biblioteki przy pomocy sondy przygotowanej w oparciu o sekwencje genu A w etapie pierwszym, potem izolacja klonu hybrydowanego z sonda
