9.Po przeprowadzeniu sekwencjonowania DNA wedlug metody dideoksy Sangera (korzysta sie z analogow 2',3'-dideoksy trifosforanow nukleotydów) otrzymano przedstawiony nizej autoradiogram :

10. Każdy rodzic ma dwa allele genu X. może on mieć postać dziką - dominującą(A) -ZDROWA...albo zmutowaną - recesywną(a)- wywołuje hemofilie albo cos równie paskudnego – o już wiem : anemie sierpowatą. W przypadku zmutowanej wersji gen nie jest przecinany przez enzym restrykcyjny np. EcoRI bo nie ma miejsca rozpoznawanego przez ten enzym i otrzymujemy jeden tylko fragment o dł. 1,3 kb. Jeśli tniemy gen dziki to otrzymujemy 2 fragmenty : 1,1kb i 0,2 kb. Znaczy gdzieś tam w środku ma jedno miejsce które jest rozpoznawane przez ten enzym restrykcyjny. Pytanie: Jakie fragmenty będziemy widzieć u rodziców których PRZYSZLE DZIECKO MA 25% PRAWDOPODOBIENSTWO NA ZACHOROWANIE NA TĄ CHOROBE

11.Plazmid X ma gen markerowy AmpR czyli na ampicyline opornosc. Bierzemy jakiś inny plazmid co ma geny oporności na ampicylinę, chloramfenikol, erytromycynę, itp, itd. Tniemy go i kolekcję otrzymanych fragmentów wklonowujemy w nasz plazmid X, ten przenosimy do komórek i szukamy rekombinantów które dostały gen ooprności na chloramfenikol - jakich podłóż możemy użyć:

12.Wyobraź sobie ze dysponujesz klonem (tzn. sekwencją) jakiegoś genu, który, możesz przypuszczać na podstawie analiz genetycznych, jest zlokalizowany w odległości nie większej niż 200kb od genu odpowiedzialnego za powstawanie jakieś choroby. Spośród podanych poniżej czynności proszę wybrać TYLKO NIEKTORE składające się w odpowiedniej sekwencji na eksperyment (technikę) który pozwoli na odczytanie sekwencji w tym obszarze 200kb. A) częściowe trawienie DNA enzymem BamHI w celu otrzymania zachodzących na siebie (względem sekwencji) fragmentów o dl ok. 20 kb B) całkowite (wyczerpujące) trawienie DNA enzymem EcoRI C) izolacja ludzkiego genomowego DNA D) izolacja genomowego DNA z E.coli E) Northern-blotting sondą otrzymana przy wykorzystaniu genu A F) powtarzanie czynności opisanych w poprzednich dwóch etapach do momentu otrzymania odpowiedniej ilości klonów G) otrzymanie biblioteki w fagu lambda H) przeszukiwanie biblioteki przy pomocy sondy przygotowanej w oparciu o sekwencje genu A w etapie pierwszym, potem izolacja klonu hybrydowanego z sonda I) subklonowanie fragmentu z końca nowoizolowanego klonu w celu otrzymania nowej sondy do ponownego przeszukiwania biblioteki i identyfikacji nowego klonu hybrydyzowanego z sond Proszę wybrać, który z poniższych zapisów, następujących po sobie czynności składających się na scharakteryzowany powyżej eksperyment, jest prawidłowy :

14.Mamy opisany eksperyment restrykcji jakiegoś faga. Najpierw 16 μl DNA w probówce. Do tego dodajemy kolejno: 1. 2μl buforu 2. 2 μl roztworu z enzymem Pytanie: Skoro optymalne stężenie NaCl dla enzymu to 50mM to jakie było wyjściowe stężenie tej soli w dodawanym buforze (po obliczeniach rozcieńczenie buforu wyszło R=10)

15. W trakcie elektroforezy w żelu agarozowym, w nieobecności bromku etydyny:

16.Dwie próbki kompetentnych komórek E.coli poddano transformacji wektorem zawierającym gen AmpR (opornosc na ampicyline). I potem mamy dwie różne sytuacje: 1. dodano do nich niewielka ilosc pozywki plynnej i po ok. 2 min umieszczono na pożywce zawierająca ampicylinę. 2. dodano ta sama ilosci pozywki plynnej i po 30 min inkubacji umieszczono na pożywce z ampicylina. Jakie zanotowano obserwacje:

17.Fragmenty (ramiona - w sumie 30kb) WEKTORA ZASTĘPCZEGO poddawano ligacji z fragmentami DNA majacymi prawidlowe konce lepkie odpowiednie do ramion wektora. Jaki maksymalny rozmiar mogl mieć wsczepiany w ten wektor odcinek: